生物技术与组织培养
朱 坚, 饶永斌, 谢宝贵, 刘新锐, 孙淑静, 郑域茹, 陈东兴
2010, 31(7): 1137-1142.
利用电穿孔转化法, 把携带人乳铁蛋白基因(hlf)的银耳表达载体 pCB-hlf 导入银耳芽孢菌株 Tr21, 用 PCR鉴定该基因阳性转化子, 检测转基因菌株的 GUS 活性, 并用 Southern 杂交检测 hlf 的插入位点。 结果表明: 电穿孔转化法的转化率可达到 9.25×106 个/μg 质粒 DNA; 抗性筛选的阳性转基因菌株中均能扩增出与预期大小相符的hlf、 GUS 和 Tnos 序列, 且 GUS 基因在转基因菌株中均有表达。 Southern 杂交结果表明, 不同转基因菌株 hlf 的插入位点不同, 有些菌株插入了 2 个或更多的拷贝。 RT-PCR 结果表明, 外源基因在银耳中能正常转录成 RNA。