Welcome to Chinese Journal of Tropical Crops,

Chinese Journal of Tropical Crops >

2019 , Vol. 40 >Issue 6: 1122 - 1129

DOI: https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-2561.2019.06.013

Biotechnology and Tissue Culture

Cloning and Bioinformatics Analysis of AsLEC Gene in Agave sisalana

  • LU Zhiwei 1, 2 ,
  • HOU Xiaowan 1, 2 ,
  • YANG Ziping 1, 2 ,
  • ZHANG Yanmei 1, 2 ,
  • LI Junfeng 1, 2 ,
  • ZHOU Wenzhao , 1, 2, *
Expand
  • 1. South Subtropical Crops Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Zhanjiang, Guangdong, 524091 China
  • 2. Zhanjiang City Key Laboratory for Tropical Crops genetic improvement, Zhanjiang, Guangdong 524091, China

Received date: 2018-08-21

  Request revised date: 2019-04-12

  Online published: 2019-07-02

Copyright

Copyright reserved © 2019. Office of Acta Agronomica Sinica All articles published represent the opinions of the authors, and do not reflect the official policy of the Chinese Medical Association or the Editorial Board, unless this is clearly specified.
Fold

Abstract

The monocotyl mannose-binding plant lectin gene can effectively inhibit the growth and reproduction of Homoptera pests with sucking mouthparts, and it was verified that those genes represent better resistance against insects in monocotyledonous and dicotyledonous plants such as Pinellia ternata, Triticum aestivum L., Nicotiana tabacum L., Gossypium spp. However, its function in sisal is still lack of in-depth study. In this study, sisal was used as materials, and the sisal lectin gene was successfully cloned by RT-PCR and named as AsLEC. Bioinformatics analysis were conducted. The results showed that the full-length CDS of AsLEC gene was 561 bp, encoding 186 amino acids. The protein molecular weight was predicted to be 19.97 ku, and the theoretical isoelectric point was 5.01, which was a hydrophobic protein. The results of homologous amino acid sequence alignment indicated that sisal lectin gene had high homology with the superfamily of monocotyl mannose-binding lectin gene in Epipactis helleborine, Leucojum vernum, Cliviaminiata, Ananas comosus (Linn.) Merr. and so on. The amino acid matching degree was more than 48%. The phylogenetic tree analysis indicated that AsLEC gene was more closely related to the lectin genes in Epipactis helleborine. Functional domain analysis of AsLEC gene suggested that it had the typical characteristics of the B-lectin gene family and belongs to the B-lectin gene family. A signal peptide of 33 amino acid residues was predicted in AsLEC protein, and there was a transmembrane alpha helix at the position from the 5th amino acid to the 27th amino acid in the N-terminus, which implyed that AsLEC protein was a secreted protein and was consistent with the functional characteristics of B-lectin protein. AsLEC protein secondary structure contained 11β-sheets, 3α-helices. Subcellular localization prediction showed that AsLEC gene was likely positioned on the cell membrane. Thecloning of sisal AsLEC gene was of great significance for studying its anti-insect function in sisal, and enriches the related research of plant lectin in monocotyledon.

Key words： Agave sisalana; monocotyl mannose-binding plant lectin; lectin

Cite this article

LU Zhiwei , HOU Xiaowan , YANG Ziping , ZHANG Yanmei , LI Junfeng , ZHOU Wenzhao . Cloning and Bioinformatics Analysis of AsLEC Gene in Agave sisalana[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2019 , 40(6) : 1122 -1129 . DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.06.013

新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes,Beardsley）属于同翅目（Homoptera）、粉蚧科（Pseudococcidae）、洁粉蚧属（Dysmicoccus）,其主要分布在热带、亚热带地区,如夏威夷、斐济、牙买加、马来群岛、墨西哥、密克罗尼西亚、菲律宾以及中国台湾等国家和地区。1998年,新菠萝灰粉蚧首次出现在我国海南昌江剑麻种植区,并迅速大面积爆发,随后快速蔓延至广东湛江地区,被中国列为外来有害生物。针对该害虫,目前尚无有效的防治措施,其对我国剑麻产业发展带来了极大的损失[1]。而植物凝集素作为抗虫育种工作的重要资源,对于新菠萝灰粉蚧的防治具有重要作用[2,3]。
植物凝集素（lectin）是在植物中普遍存在的一类可以与单糖或者寡糖可逆性结合的蛋白质[4],根据结合糖的特异性,植物凝集素主要包括单子叶甘露糖结合凝集素家族、木菠萝（Jacalin）凝集素家族、豆科类凝集素家族、几丁质结合凝集素家族、苋菜凝集素家族、Ⅱ-型核糖体失活蛋白家族、葫芦科韧皮部凝集素家族等7个蛋白质家族,其中单子叶甘露糖结合凝集素家族基因对同翅目刺吸式害虫具有较好的毒杀作用[2-3, 5]。如徐琼芳等[6]将雪花莲凝集素基因转入小麦中,发现其对蚜虫具有较好的抗性;Liu等[7]成功将AalT/GNA融合蛋白转入烟草后,其对咀嚼式和刺吸式昆虫表现出明显的抗性;肖松华等[8]报道转外源凝集素的棉花对棉蚜的吸引力降低。然而,植物凝集素在剑麻中是否具有相同或相似的功能有待进一步研究。
本研究拟在前期已完成转录组测序的基础上,根据转录组拼接序列设计剑麻lectin基因CDS全长序列克隆引物,并对克隆得到的基因序列进行氨基酸理化性质、同源氨基酸比对、进化树构建、功能结构域分析、亚细胞定位以及信号肽预测等一系列生物信息学分析,以期初步阐明剑麻lectin基因的一系列相关基础功能,为进一步深入研究其表型功能奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

所用材料为中国热带农业科学院南亚热带作物研究所剑麻研究室种质资源圃保存的3年生剑麻H.11648叶片。

1.2 方法

1.2.1 总RNA的提取与cDNA链的合成 利用全式金生物技术有限公司的RN04-总RNA提取试剂盒（TRIzol法）对剑麻叶片进行总RNA提取,同时利用琼脂糖电泳及微量紫外分光光度计检测技术对总RNA质量进行检测分析。取3 μg总RNA,使用全式金EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix试剂盒进行反转录合成cDNA。
1.2.2 AsLEC基因CDS全长序列引物设计及克隆 在本研究室前期已完成的剑麻转录组测序的基础上,根据转录组拼接序列设计CDS全长序列克隆引物。其中正向引物为LEC-F（5′-CAACACAAAATCAGTGAAGCAGAAG-3′）,反向引物为LEC-R（5′-AAATCACTCATAAAACAAGACAGAA-3′）。以剑麻cDNA为模板对AsLEC基因编码区（coding sequence, CDS）序列进行扩增。PCR 扩增体系及反应条件如下：总体积25 μL,模板0.1 μg,引物LEC-F和LEC-R均为0.4 μmol/L,2×EasyTaq® PCR SuperMix 12.5 μL,用无菌ddH2O补齐至25 μL;扩增程序为95 ℃预变性3 min;95 ℃ 30 s,59 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,38个循环;72 ℃延伸10 min,4 ℃存放。
对PCR产物纯化后,连接至pEASY®-T1 Cloning Kit（全式金公司）载体,然后转化大肠杆菌Trans1-T1 Phage Resistant感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑选白色的阳性克隆菌斑后进行菌落PCR反应检测,最后送菌液至华大基因进行测序分析。
1.2.3 AsLEC基因生物信息学分析 通过NCBI的ORF（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/）在线软件对AsLEC基因开放阅读框进行分析;利用NCBI的在线blast工具搜索获得AsLEC蛋白的同源序列,随后通过Jalview 2.10软件对其进行氨基酸多序列比对及二级结构分析;利用MEGA6和FigTree软件进行系统进化树构建以及进化树优化;通过ExPASy-ProtParam tool在线软件(http://web.expasy.org/protparam/)对剑麻AsLEC氨基酸序列的理化性质进行预测;利用ExPasy (http://web.expasy.org/protscale/)在线软件对剑麻AsLEC氨基酸亲疏水性进行预测;通过NCBI 在线数据库 (http://www.ncbi.Nlm.nih.gov/Structure/ cdd/wrpsb.cgi)对AsLEC氨基酸序列的功能结构域进行分析预测;利用Cell-PLoc 2.0软件（http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/）对AsLEC蛋白进行亚细胞定位分析;通过SignalIP4.1Server软件（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）对其信号肽进行在线预测;利用TMHMM Server v. 2.0 软件 (http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)对其跨膜结构进行在线预测分析[9,10]。
1.2.4 AsLEC基因表达模式分析 利用PrimerQuest Tool（https://sg.idtdna.com/ Primerquest/ Home/Index）和Primer-BLAST（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/index. cgi?LINK_ LOC=BlastHome）在线软件进行定量引物设计。分别以剑麻紫色卷叶病发病0、60、90 d三个时间点的剑麻高抗和高感植株的发病叶片总RNA反转录cDNA为模板,进行qRT-PCR分析。实时荧光定量PCR采用全式金TransStart® Tip Green qPCR SuperMix试剂盒。反应体系为2×TransStart Tip Green qPCRSuperMix 10 μL,cDNA模板0.5 μL,上下游引物（10 μmol/L）各0.5 μL,然后用无菌去离子水补齐至20 μL。在LightCycler® 480实时荧光定量PCR仪上进行扩增,扩增的反应程序为：94 ℃预变性1 min;94 ℃变性10 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 s,45个循环;最后72 ℃延伸10 min。每个样品设置3个生物学重复。利用Excel 2010软件对其差异显著性进行分析。

2 结果与分析

2.1 AsLEC基因T克隆菌落PCR结果

如图1所示,1、2、3三个菌落PCR结果中,1大小为561 bp左右,与目的条带大小一致,而2、3条带大小与目的条带不符,因此,菌落1可能为克隆的AsLEC基因菌落。
图1 AsLEC基因T克隆菌落PCR结果

M为DL 2000 Marker;1、2、3均为菌落PCR条带。

Fig. 1 The result of colony PCR for AsLEC gene T cloning

M represents DL 2000 Marker; 1, 2, 3 represent the band of colony PCR.

2.2 AsLEC基因编码蛋白质理化性质

以剑麻cDNA为模板,用AsLEC基因CDS全长引物LEC-F1,LEC-R1进行PCR扩增。扩增片段包含完整的CDS序列,长561 bp,编码186个氨基酸残基（图2）。
图2 AsLEC基因的全长序列及其编码的氨基酸

Fig. 2 Full-length sequence of cDNA and its coded amino acid for AsLEC gene

利用ExPasy软件对剑麻AsLEC氨基酸序列的理化性质进行在线预测。结果表明AsLEC氨基酸序列的理论等电点（PI）为4.96,分子量为19.97 ku,AsLEC基因编码蛋白质的分子式为C893H1375 N231O273S8,蛋白质半衰期为30 h,不稳定指数为18.68,为稳定蛋白。AsLEC基因编码的蛋白有12个带负电荷的氨基酸残基（Glu+Asp）,9个带正电荷的氨基酸残基（Lys+Arg）,总的亲水性平均系数（Grand average of hydropathicity）为0.003,氨基酸组成见表1。
表1 AsLEC蛋白质的氨基酸组成

Tab. 1 Amino acid composition of AsLEC proteins

氨基酸名称
Amino acid		 数量
Amount		 占比
Percentage/%		 氨基酸名称
Amino acid		 数量
Amount		 占比
Percentage/%
Ala (A) 17 9.10 Ile (I) 12 6.50
Arg (R) 3 1.60 Leu (L) 17 9.10
Asn (N) 15 8.10 Lys (K) 6 3.20
Asp (D) 6 3.20 Met (M) 4 2.20
Cys (C) 4 2.20 Phe (F) 4 2.20
Gln (Q) 8 4.30 Pro (P) 9 4.80
Glu (E) 6 3.20 Ser (S) 13 7.00
Gly (G) 19 10.20 Thr (T) 16 8.60
His (H) 1 0.50 Trp (W) 5 2.70
Tyr (Y) 10 5.40 Val (V) 11 5.90
Sec (U) 0 0 Pyl (O) 0 0

2.3 剑麻AsLEC功能结构域分析及同源氨基酸序列比对

利用NCBI在线软件对AsLEC蛋白功能结构域进行预测,结果表明该氨基酸属于B-lectin蛋白超家族[11],见图3。通过NCBI的Blast工具对AsLEC基因序列进行在线分析,结果表明AsLEC与单子叶植物lectin基因同源性更高,氨基酸相似性达到50%以上,其中与魔芋lectin （AHE93335.1）相似性达到60%,与姜黄lectin（AKT75734.1）相似性达到59%,与菠萝mannose-specific lectin-like（XP_020104167.1）相似性达到58%,与水仙lectin（ACR15122.1）相似性达到48%,与君子兰lectin（AAA19912.1）相似性达到53%,与雪花莲lectin（1MSA_A）相似性达到55%。
图3 AsLEC基因编码蛋白的功能结构域

图中数字表示氨基酸位置。

Fig. 3 The function domain of amino acid sequence coded by AsLEC gene

The number in picture represents the position of amino acids.

选取上述Blast的部分结果进行同源性比对（图4）,由图2和图4可知,剑麻AsLEC氨基酸序列和其他植物lectin一样,具有B-lectin（Bulb-type mannose-specific lectin）基因家族的典型特征：氨基酸序列高度保守,每个多肽具有11个β折叠,其中前3个为成熟蛋白质单体的Ⅰ型亚结构域,后面8个分别形成均具有4个β折叠的Ⅱ和Ⅲ型亚结构域,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个亚结构域之间通过环相连（图5）。每个亚结构域表面的缝隙中均存在一个相同的保守性甘露糖结合位点（Q-D-N-V-Y,在图4中分别用红框做标记）。4个这样的单体通过非共价键结合成为成熟的蛋白质,上述Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三个典型的亚结构域为B- lectin基因家族的标志性结构域[12,13],表明克隆得到的基因片段为单子叶甘露糖结合凝集素类lectin基因,并命名为AsLEC。
图4 AsLEC同源蛋白氨基酸序列比较及二级结构预测

AsLEC蛋白氨基酸序列与其他物种具有较高的同源性。其中,JNetPRED（prediction）即为蛋白质二级结构预测结果,α螺旋（helices）用红色的条形表示,β折叠（sheets）用绿色箭头表示,差异主要出现在N端和C端,二级结构预测显示,AsLEC蛋白含有11个β折叠。

Fig. 4 The homology comparison of AsLEC amino acid sequence with other genes and the prediction of secondary structure for AsLEC amino acid sequence

There are good homology between AsLEC protein and other species proteins. In the figure, JNetPRED represents the predicted result of secondary structure for AsLEC amino acid sequence. The differences are mainly located in the N-terminal and C-terminal. The prediction of secondary structure indicate that AsLEC protein have 11 β-pleated sheet.

图5 lectin蛋白单体的三维结构

星号$\bigstar$表示糖结合位点,不同颜色条带代表不同的亚结构模块。

Fig. 5 The Ribbon diagrams of the three-dimensional conformations for the lectin protein monomer

Stars($\bigstar$)show the monosaccharide-binding sites. The ribbon of different colors represent different secondary structure motif.

2.4 AsLEC蛋白的信号肽及跨膜结构域预测

利用SignalIP4.1Server和TMHMM Server v.2.0在线软件对AsLEC蛋白进行信号肽和跨膜结构域预测,结果见图6和图7。从图6中可以看出,在AsLEC蛋白的N端第33~34位置处氨基酸的S值最为陡峭,C值最大,因此该位置为信号肽的剪切位点,AsLEC蛋白具有一段33个氨基酸残基的信号肽。从图7可以看出,在AsLEC 蛋白的N端第5~27位置处存在一个跨膜α螺旋（TMhelix）。综合以上信息,表明AsLEC蛋白为分泌型蛋白质,这与B-lectin蛋白的功能特点相吻合。
图6 AsLEC蛋白序列信号肽预测结果

横坐标为氨基酸的位置,纵坐标为每项指标对应的值。

Fig. 6 The predicted results of signal peptide for AsLEC protein

The X-axis is the position of the amino acid, and the Y-axis is the value corresponding to each indicator.

图7 AsLEC蛋白跨膜结构域预测

横坐标为氨基酸序列位置,纵坐标为对应指标的概率。

Fig. 7 The prediction of transmembrane structures for AsLEC protein

The X-axis is the position of the amino acid, and the Y-axis is the probability corresponding to each indicator.

2.5 AsLEC系统进化树的构建

根据1.2.3中NCBI的blast结果,选取部分植物的lectin氨基酸序列以及另外三类lectin氨基酸序列,利用MEGA6和FigTree软件进行系统进化树构建,其中构建方法采用最大相似法,Bootstrap值为1000（图8）。进化树整体聚为四大类,其中HrLEC、MtLEC和RcLEC属于几丁质结合类植物凝集素,SeLEC和SnLEC2属于Ⅱ型核糖体失活蛋白类植物凝集素,DbLEC和UeLEC属于豆科类植物凝集素,而AsLEC和其他的蛋白质均属于单子叶甘露糖结合类植物凝集素,进一步验证了AsLEC基因的凝集素类别。
图8 AsLEC蛋白及其同源蛋白系统进化树分析

比例尺表示氨基酸替代率。

Fig. 8 Phylogenetic tree analysis of AsLEC protein and its homologous protein system

Scale represents the ratio of amino acid substitution.AsLEC: Agave sisalana lectin; GnLEC5: AAL07478.1; NtLEC: ACR15122.1; LsLEC: AAW22055.1; HvLEC: AAP57409.1; AmLEC: AAP37975.1; ZcLEC: AAM27447.1; EhLEC1: AAA19577.1; LrLEC: AAP20877.1; Ak3DAKAp: AAP04617.1; AkLECp: AAP22170.1; ZoLECp: AAV70492.1; CsLECp: AAO59506.1; ZoLEC: ACJ66865.1; EhLEC2: AAC48927.1; DpLEC: BAD67183.1; GeGas: AAX10109.1; GeAnti: AAK59994.1; ChLEC: AAA19578.1; AfLEC: BAP75575.1; AlLEC: ABF70332.1; PrLEC: AAW82332.1; DbLEC: 1LUL_F;UeLEC: 1QNW_D; SeLEC: BAD93342.1; SnLEC: AAL04121.1; HrLEC: ABW34946.1; MtLEC: KEH43013.1; RcLEC: XP_002534656.1.

2.6 AsLEC蛋白亚细胞定位预测

蛋白质在细胞中需要处于特定的位置才能发挥其正常功能,在一定程度上,蛋白质的亚细胞定位决定了其最终的基因功能,是其功能的体现。利用Cell-PLoc 2.0在线预测软件（http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/）对AsLEC蛋白进行分析,发现其亚细胞定位很可能存在于细胞膜（图9）。此外,通过cNLS mapper 软件（http: //nls-mapper.iab.keio.ac.jp/cgi-bin/NLS_Mapper_ form.cgi）对AsLEC氨基酸序列进行在线分析,发现其不存在核定位信号,进一步验证了其定位在细胞膜的可能性。
图9 AsLEC蛋白亚细胞定位预测结果

Fig. 9 Subcellular localization prediction results of AsLEC protein

2.7 AsLEC基因表达模式分析

对AsLEC基因在剑麻紫色卷叶病高抗和高感植株不同发病阶段进行表达模式分析,结果见图10。从图10中可以看出,与高感植株相比,AsLEC基因在剑麻紫色卷叶病高抗植株不同发病阶段中均呈现较高表达量,两者之间表达量最高可相差3.5倍,推测AsLEC基因在剑麻对紫色卷叶病抗性中起着重要作用。
图10 剑麻AsLEC基因在不同发病时期的表达量

Fig. 10 The expression level of agave AsLEC gene in different stages of disease

3 讨论

本研究克隆获得AsLEC基因,通过功能结构域分析得出其具有B-lectin基因家族特有的典型特征序列,归为B-lectin（Bulb-type mannose-specific lectin）基因家族。B-lectin基因家族为植物凝集素超家族重要的一员[14],除了B-lectin（单子叶甘露糖结合凝集素家族）外,植物凝集素家族还包括葫芦科韧皮部凝集素家族、2-型核糖体失活蛋白家族、豆科类凝集素家族、木菠萝（Jacalin）凝集素家族、苋菜凝集素家族、几丁质结合凝集素家族[15]。与雪花莲、水仙、君子兰等植物的单子叶结合甘露糖凝集素家族相比,剑麻AsLEC单体蛋白除具有3个保守的亚结构域、每个亚结构域表面的缝隙中均存在一个相同的保守性甘露糖结合位点以及11个保守的β折叠二级结构等这些单子叶结合甘露糖凝集素家族的共同特征外,还含有一些变异结构,如其N端明显多出5个氨基酸残基以及保守性的甘露糖结合区域也发生1个氨基酸残基的改变等。其中,甘露糖结合区域作为单子叶结合甘露糖凝集素基因发挥相关生物学功能所必不可少的结构成分,它的典型结构为：结合区域均位于每个凝集素蛋白的亚结构域表面缝隙处[16],高度保守的Q-D-N-V-Y氨基酸残基通过氢键与甘露糖特异性结合,每个凝集素蛋白单体含有3个同样的位点,成熟的凝集素蛋白共有12个甘露糖结合位点[17]。然而在剑麻AsLEC蛋白中,其甘露糖结合区域中高度保守的Q-D-N-V-Y突变为Q-D-N-A-Y。推测这种变化为进化中碱基突变产生,此变化对于蛋白质结合甘露糖是否产生影响,尚有待进一步研究。
总之,单子叶甘露糖结合凝集素家族在多种植物中均存在,且在抗虫、抗病毒、免疫诱导以及入药[18,19]等方面发挥着重要作用。本研究克隆得到的剑麻AsLEC基因虽然在N端保守结构域和甘露糖特异结合位点处存在部分变异,但是其在总体机构上仍符合单子叶结合甘露糖凝集素家族的基本特征,且在剑麻紫色卷叶病高抗植株中呈现较高的表达量。然而这些结构的差异是否影响AsLEC基因在剑麻中行使正常的功能,这些尚不清晰,有待进一步研究。因此,本研究获得了剑麻AsLEC基因,对于后续研究其在剑麻中的功能奠定了重要基础。

The authors have declared that no competing interests exist.

作者已声明无竞争性利益关系。

References

Publishing order | Descend order by publishing year | Descend order by cited within
[1]
张妮, 陈泽坦, 徐雪莲 , 等. 不同寄主对新菠萝灰粉蚧生长发育和繁殖的影响[J]. 热带作物学报, 2011,32(9):1733-1735.

[2]
马琛, 徐涛 . 植物凝集素抗虫性研究[J]. 现代园艺, 2017(5):31-32.

[3]
张晓英, 甘敬, 尹伟伦 . 国槐转雪花莲凝集素基因及抗蚜性[J]. 吉林科学, 2010,46(2):51-56.

[4]
朱家红, 徐靖, 畅文军 , 等. 巴西橡胶树HbHEV3基因的克隆和表达分析[J]. 西北植物学报, 2014,34(8):1529-1533.

[5]
刘玎, 陈劲, 刘志 , 等. 掌叶半夏凝集素基因PPA2抗蚜功能分析[J]. 生物技术通报, 2016,32(10):180-187.

DOI

[6]
徐琼芳, 田芳, 陈孝 . 转GNA 基因小麦新株系的分子检测和抗蚜虫性鉴定[J]. 麦类作物学报, 2005,25(3):7-10.

DOI

[7]
Liu S M, Li J, Zhu J Q , et al. Transgenic plants expressing the AalT/GNA fusion protein show increased resistance and toxicity to both chewing and sucking pests[J]. Insect Science, 2016,23(2):265-276.

DOI

[8]
肖松华, 刘剑光, 吴巧娟 . 转外源凝集素基因棉花对棉蚜的抗性鉴定[J]. 棉花学报, 2005,17(2):6-10.

[9]
肖政, 李纪元, 范正琪 , 等. 荔波连蕊茶GA2oxl 基因的克隆及表达分析[J]. 林业科学研究, 2016,29(1):41-47.

[10]
路东晔, 贺玉娇, 金娜, 等 . 沙柳 SpsLAS 基因克隆及生物信息学分析[J]. 分子植物育种, 2017,15(2):483-491.

[11]
Marchler-Bauer A, Bo Y, Han L Y , et al. CDD/SPARCLE: functional classification of proteins via subfamily domain architectures[J]. Nucleic Acids Research, 2017,45:D200-D203.

DOI

[12]
梁辉 . 转雪花莲凝集素基因小麦抗蚜性及建立高效小麦转化体系的研究[D]. 武汉: 华中农业大学, 2005.

[13]
Barre A, Bourne Y, Van Damme E J , et al. Mannose-binding plant lectins: Different structural scaffolds for a common sugar-recognition process[J]. Biochimie, 2001,83(7):645-651.

DOI

[14]
Hester G, Kaku H, Goldstein I J, Wright C S . Structure of mannose-specific snowdrop (Galanthus nivalis) lectin is representative of a new plant lectin family[J]. Nature Structural Biology, 1995 , 2(6):472-479.

DOI

[15]
王静静 . 芸豆植物凝集素及其制剂的生殖生物学相关性质研究[D]. 昆明: 云南师范大学, 2017.

[16]
刘晓娜 . 植物凝集素基因职务表达载体的构建及遗传转化甘蔗[D]. 海口: 海南大学, 2010.

[17]
赵欢, 彭正松 . 半夏属植物凝集素的研究进展[J]. 天然产物研究与开发, 2014,26(9):1531-1537.

[18]
段晓亮, 许兰杰, 侯起岭 , 等. 转人工合成中国水仙凝集素基因(sNTL)小麦的获得及其抗麦长管蚜效果分析[J]. 华北农学报, 2016,31(1):8-14.

DOI

[19]
王洪乐, 齐连芬, 杨超沙 , 等. 掌叶半夏凝集素基因克隆及原核表达[J]. 华北农学报, 2018,33(1):109-114.

Options
Outlines

/

〈 〉

琼ICP备19001573号
Copyright © Chinese Journal of Tropical Crops, All Rights Reserved.
Tel: 0898-66989102　E-mail: rdzx136@163.com
Powered by Beijing Magtech Co. Ltd