1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
表1 引物信息表Tab. 1 Primer information |
| 引物用途 Primer purpose | 引物名称 Primer name | 引物序列（5¢-3¢） Primer sequence (5¢-3¢) | 退火温度 Tm/℃ |
|---|---|---|---|
| 5¢RACE | EsNrf2-5¢-GSP1 | CAAACAATAAACTCGTATTACGTCAA | 71.5 |
| EsNrf2-5¢-GSP2 | CGCCTAGAACGCCAAGCACCTCGGG | 70.9 | |
| 3¢RACE | EsNrf2-3¢-GSP1 | CGTCGGCGACAATTTTGGGCGGCAA | 71.6 |
| EsNrf2-3¢-GSP2 | AAATTAATTATTTCTTCAGCAGGTAT | 71.4 | |
| EsNrf2 CDS clone | EsNrf2-CDS-F | CCGGTTAATATTATGTTCGTG | 58.2 |
| EsNrf2-CDS-R | TCCTCCTGCAGTTTAGTTGCTGGT | 57.1 | |
| RT-qPCR | Esactin-F | AAGCCATCTATGGTGCCATCTT | 56.8 |
| Esactin-R | GAATCACGACGAGCCATATC | 57.3 | |
| EsNrf2-F | GCCCTGAACATCCCCATCCC | 59.2 | |
| EsNrf2-R | GCCACCTTGTTCTTGCCCCTC | 58.5 | |
| EsSOD-F | AGGTGACAACACAAACGG | 55.8 | |
| EsSOD-R | CTCCACAAGCAATACGGC | 56.7 | |
| EsCAT-F | AACAAACGGTGGGCAAGAC | 57.4 | |
| EsCAT-R | TAGGCTCACAAACAGTATCAGC | 58.0 |
1.3 数据处理
2 结果与分析
2.1 六点始叶螨EsNrf2基因的克隆
图1 六点始叶螨EsNrf2基因克隆电泳图M：DNA marker;1：5¢RACE-PCR产物片段;2：3¢RACE-PCR产物片段;3：六点始叶螨EsNrf2基因编码区产物片段。 Fig. 1 Electrophoresis of EsNrf2 M: DNA marker; 1: 5¢RACE-PCR fragment; 2: 3¢RACE-PCR fragment; 3: EsNrf2 CDS fragment. |
图2 六点始叶螨EsNrf2的核苷酸序列及其对应的氨基酸序列5¢和3¢非翻译区用小写的碱基字母表示,编码区用大写的碱基字母表示,起始和终止密码子以黑色粗体字标出。 Fig. 2 Nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of EsNrf2 The 5¢and 3¢untranslated regions are represented by lowercase base letters and the coding regions are represented by uppercase base letters. Moreover, the underline denotes the initiation and the translation stop codon. |
2.2 六点始叶螨EsNrf2基因与不同昆虫（螨）Nrf2基因的序列比对
图3 六点始叶螨与其他昆虫（螨）的Nrf2同源基因序列比对黑框部分序列为不同物种Nrf2的DNA结合区域。 Fig. 3 Multiple alignment of Nrf2 homologous genes between E. sexmaculatus and other insects (mites) The black frame part of the sequence is the DNA binding region of Nrf2 of different species. |
图4 六点始叶螨与其他昆虫（螨）的Nrf2蛋白序列进化分析A：六点始叶螨与其他昆虫（螨）的Nrf2基因进化树;B：六点始叶螨与其他昆虫（螨）的Nrf2基因DNA结合域保守序列。 Fig. 4 Evolution analysis of Nrf2 protein sequence of E. sexmaculatus and other insects (mites) A: Phylogenetic tree of Nrf2 gene of E. sexmaculatus and other insects (mites); B: Conservative sequence of Nrf2 gene binding domain of E. sexmaculatus and other insects (mites). |
2.3 不同dsRNA饲喂浓度和时间对六点始叶螨EsNrf2基因沉默效率的影响
2.4 沉默EsNrf2对六点始叶螨死亡率的影响
2.5 沉默六点始叶螨转录因子Nrf2对抗氧化酶基因表达的影响
图7 沉默EsNrf2对六点始叶螨取食抗、感螨橡胶树后抗氧化酶基因表达的影响A：EsSOD;B：EsCAT;不同小写字母表示不同处理间差异显著（P<0.05）。 Fig. 7 Effect of EsNrf2 silencing on transcription of antioxidant enzymes genes while E. sexmaculatus feeding on resistant and susceptible rubber tree germplasms A: EsSOD; B: EsCAT; Different lowercase letters indicate significant difference among different treatments (P<0.05). |
2.6 沉默六点始叶螨转录因子Nrf2对抗氧化酶活性的影响
图8 沉默EsNrf2对六点始叶螨取食抗、感螨橡胶树后抗氧化酶活性的影响A：SOD;B：CAT;不同小写字母表示不同处理间差异显著（P<0.05）。 Fig. 8 Effect of EsNrf2 silencing on activities of antioxidant enzymes while E. sexmaculatus feeding on resistant and susceptible rubber tree germplasms A: SOD; B: CAT; Different lowercase letters indicate significant difference among different treatments (P<0.05). |